silimarino ekstrahavimo procesas
Silimarinas, flavonolignanų mišinys, pasižymintis daugybe farmakologinių savybių, gaunamas iš pieno erškėtrožių (Silybum marianum L. Gaertner) vaisių. Dėl didelio lipidų kiekio erškėtrožių vaisiuose Europos farmakopėja rekomenduoja dviejų etapų ekstrakciją. Pirma, vaisiai riebaluojami 6 valandas, naudojant n-heksaną; antra, silimarinas dar 5 valandas ekstrahuojamas metanoliu.
Pateikti duomenys rodo, kad šį itin ilgą tradicinį „Soxhlet“ ekstrahavimo procesą galima sutrumpinti iki kelių minučių naudojant suslėgto skysčio ekstrakciją (PLE). PLE taip pat leidžia pašalinti riebalų šalinimo etapą, reikalingą tradicinei procedūrai, tokiu būdu supaprastinant silimarino ekstrahavimo procedūrą ir užkertant kelią silimarino nuostoliams, kuriuos sukelia riebalų pašalinimas. PLE regeneracijos, gautos optimizuotomis ekstrahavimo sąlygomis, yra akivaizdžiai geresnės nei gautos farmakopėjoje rekomenduojamos Soxhlet ekstrahavimo procedūros metu.
Silychristino, silydianino, silybino A, silibino B, izosilibino A ir izosilibino B derlius acetone yra atitinkamai 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 ir 1,5 mg / g neriebaluotų vaisių. 5 valandų trukmės „Soxhlet“ ekstrahavimas metanoliu be riebalų vaisiuose suteikia tik ~ 72% silimarino kiekio, gauto per 10 minučių PLE 125 ° C temperatūroje.
Kas yra Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, paprastai vadinamaspieno usnisMarian Thistle, Mary Thistle arba Saint Mary' s Thistle yra vienmetis arba dvejus metus auginamas Asteraceae šeimos augalas. Augalas, iš pradžių augęs Pietų Europoje ir Azijoje, dabar aptinkamas visame pasaulyje (1). Ši varginanti piktžolė šiuo metu auginama kaip vaistinis augalas ir yra viena iš svarbiausių vaistinių augalų Europoje.
Pieno erškėčiai buvo naudojami medicininiais tikslais daugiau nei 2000 metų, dažniausiai gydant kepenų ligas (cirozę ir hepatitą), taip pat apsaugant kepenis nuo toksinių medžiagų (2–5). Naujausius tyrimus domino šis augalas paskatino tyrimai, rodantys išskirtinai didelį priešnavikinį aktyvumą. Augalo ištraukos dabar intensyviai tiriamos eksperimentinei vėžio prevencijai ir šalinant chemoterapijos šalutinius poveikius (6). Naujausios ataskaitos parodė, kad šio augalo ekstraktams taip pat būdinga daugybė kitų farmakologinių veiklų, tokių kaip priešuždegiminis ir antifibrozinis poveikis (2, 7, 8).
Silimarinas, flavonolignanų mišinys, pasižymintis daugybe farmakologinių savybių, yra gaunamas iš pienių (Silybum marianum L. Gaertner) sėklų. Iki šiol bendros silimarino ekstrahavimo procedūros yra pagrįstos lėto tirpiklio ekstrahavimo aukštoje temperatūroje metodais. Su šiais metodais susiję trūkumai paskatino ieškoti naujų alternatyvių gavybos procesų, kurie galėtų papildomai pagerėtisilimarino ekstraktaikokybė. Pastarasis yra ypač svarbus silimarino vartojimo atžvilgiu. Gautuose silimarino ekstraktuose iš tikrųjų gali būti toksiškų organinių liekanų, kuriuos reikia pašalinti, kad patenkintų vartotojų priimtinumą.
Bandant patobulinti silimarino ekstrahavimo procesą ir padaryti jį efektyvesnį bei ekologiškesnį, neseniai ištirpinamas mikrobangų krosnelė, ištirpinamas ultragarsu, ištirpinamas skystis, išgaunamas fermentas, superkritinis ir ypač subkritinis. taip pat žinomi kaip suslėgto karšto vandens gavybos metodai.
Medžiagos ir metodai
Augalinė medžiaga
Džiovinti S. marianum L. Gaertner vaisiai buvo įsigyti iš vietinės vaistinės (Liublinas, Lenkija) 2011 m. Rudenį. Pakankamai didelis reprezentatyvus augalinės medžiagos mėginys (apie 500 g) buvo sumaltas ir sijotas, kad dalelių dydis būtų 0,4. mm. Ekstrahavimui buvo naudojamos tiksliai pasvertos medžiagos dalys.
Medžiagos ir reagentai
Standartizuotas S. marianum L. Gaertner ir silybino B standartinis sausasis ekstraktas (grynumas 98%) buvo įsigytas iš Sigma-Aldrich, Lenkija. Acetonas, etilacetatas, fosforo rūgštis, n-heksanas (visi jie yra analizinio reagento kokybės) ir metanolis (analitinių reagentų ir HPLC klasės) buvo įsigyti iš Lenkijos chemijos gamyklos (POCh, Glivice, Lenkija). Vanduo buvo gryninamas naudojant Milli-Q sistemą iš Millipore (Millipore, Bedford, MA, JAV). Neutralus stiklas, gautas kaip dovanos iš vietinių stiklo fabrikų (0,4–0,6 mm frakcija), buvo naudojamas kaip disperguojanti priemonė PLE ląstelėje.
Skysčio ekstrahavimas slėgiu
PLE buvo atliktas su „Dionex ASE200“ instrumentu („Dionex Corp.“, Sunnyvale, CA, JAV). Augalinė medžiaga (0,5 g) buvo sumaišyta su inertine medžiaga (neutralus stiklas) ir įdėta į 22 ml nerūdijančio plieno ekstrahavimo kamerą, kurios apačioje buvo filtravimo popierius. Kitas filtro popieriaus apskritimas buvo dedamas ekstrahavimo kameros viršuje. Galiausiai celė buvo sandariai uždaryta ir įdėta į kaitinimo krosnį.
Kameros turinys išgaunamas esant 60 barų darbiniam slėgiui. Proceso pabaigoje ekstrahuotas mėginys buvo praplaunamas naudojant tirpiklio tūrį, lygų 60% ekstrahavimo elemento tūrio. Galiausiai mėginys buvo išvalytas 60 s, naudojant suslėgtą azotą (150 psi), ir ekstraktas surenkamas į 60 ml stiklinį buteliuką su teflonu padengtu guminiu dangteliu. Surinkto ekstrakto tūris buvo nuo 25 iki 31 ml, priklausomai nuo ekstrahavimo ląstelės pakavimo tankio. Gautas ekstraktas supilamas į 50 ml matavimo kolbą ir pripildomas iki atitinkamo tirpiklio tipo. Trimis nepriklausomais ekstraktais buvo atlikta tomis pačiomis sąlygomis. Tarp bandymų sistema buvo nuplauta tinkamu ekstrahavimo tirpikliu.
Tiriami PLE parametrai buvo tirpiklio tipas (metanolis, acetonas ir etilacetatas), temperatūra (50, 75, 100, 125 ir 150 ° C), laikas (5, 10, 15 ir 20 min.) Ir ekstrahavimo ciklų skaičius (1 –5). PLE riebalų šalinimo procese n-heksanas buvo naudojamas kaip tirpiklis, o tiriami parametrai buvo temperatūra (50 ir 100 ° C) ir lipidų pašalinimo laikas (5 ir 10 min.). Acetono ir etilo acetato ekstraktai vakuume išgarinami iki sausumo ir prieš chromatografinę analizę dar kartą ištirpinami metanolyje.
Soxleto ekstrahavimas
Išsamus ekstrahavimas „Soxhlet“ aparate buvo atliekamas naudojant 2,0 g medžiagos dalis. Tiksliai pasverti mėginiai buvo perkelti į popierinį antpirštį. Pakrautas antpirštis buvo įstatytas į 100 ml Soxhlet ekstraktorių. Ekstrakcijos buvo atliekamos dviejų pakopų procese (n=3). Pirmajame procedūros etape augalinė medžiaga buvo riebaluota 6 valandas, naudojant 75 ml n-heksano. Antruoju atveju silimarinas 5 valandas buvo ekstrahuotas 75 ml metanolio. Atvėsus iki kambario temperatūros, gautas ekstraktas buvo perkeltas į 100 ml matavimo kolbą, kuri vėliau iki jos tūrio buvo užpildyta metanoliu. Buvo atlikti trys nepriklausomi ištraukimai.
Ekstraktų chromatografinė analizė
HPLC matavimai buvo atlikti naudojant „Dionex“ skysčių chromatografą („Dionex Corp.“), susidedantį iš chromatografijos gaubto (LC20) su PEEK automatiniu įpurškimo vožtuvu, turinčiu 10 μL mėginio kilpą, gradientinį siurblį (GP50), absorbcijos detektorių (AD25) ir fotodiodų matricos detektorių (PDA100). Visa chromatografinė sistema buvo kontroliuojama „PeakNet6“ duomenų kaupimo sistemos. Chromatografiniai atskyrimai buvo atlikti 40 ° C temperatūroje, naudojant „Prodigy“ ODS-2 kolonėlę (5 μm, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, JAV). Judrioji A fazė buvo metanolio ir fosforo rūgšties vandeninio tirpalo mišinys, kuriame buvo 0,5 ml 75% fosforo rūgšties 100 ml tirpalo (35: 65, t / t). Judrioji B fazė buvo metanolio ir vandeninio fosforo rūgšties tirpalo mišinys, kuriame buvo 0,5 ml 75% fosforo rūgšties 100 ml tirpalo (50: 50, t / t). Srauto greitis buvo 0,8 ml / min. Analizės buvo atliekamos judančios fazės gradientu, kai B procentas A svyravo taip: pradinė koncentracija, 0% B; 28 min., 100% B; 35 min., 100% B, 36 min. 0% B. Prieš kitą analizę kolonėlė buvo subalansuota naudojant judamąją fazę, kurioje buvo 0% B, 20 min. Kiekvienas ekstraktas buvo analizuojamas HPLC tris kartus. Flavonolignanų aptikimo bangos ilgis buvo nustatytas 288 nm, o smailės apibūdinimui taip pat buvo užfiksuoti UV-Vis spektrai nuo 210 iki 500 nm.
Kokybinė ekstraktų analizė buvo atlikta lyginant smailių sulaikymo laiką ir jų UV – Vis spektrus ekstraktuose, palyginti su standartizuoto sauso silimarino mėginio sulaikymo laikais. Norint paruošti standartizuotą sausą silimarino tirpalą, 0,02 g mėginio dalis, kurioje buvo 5,0 mg silibino A + B, buvo ištirpinta 50 ml metanolio. Silichristino, silidianino, silibino A, silibino B, izosilibino A ir B smailės pasireiškė sulaikymo trukme atitinkamai 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 ir 34,8 min. Kiekybinė analizė buvo pagrįsta silibino B standartu ir buvo naudojamas išorinis standartinis metodas. Iš penkių junginio koncentracijų 0,1–1,0 mg / ml buvo sukurta kalibravimo kreivė. Buvo atlikti trys smailės ploto matavimai kiekvienai etaloninio tirpalo koncentracijai. Gautos kalibravimo kreivės charakteristikos buvo tokios: nuolydis, 0,516 ir perimtas, 0,003. Nustatyta, kad kalibravimo kreivė yra tiesinė bandomoje koncentracijos srityje. Nustatyta, kad koreliacijos koeficientas yra> 0,995. Dėl sunkumų perkant silichristino, silidianino, silibino A, izosilibino A ir B standartus, šių junginių kiekiai buvo apskaičiuoti susiejant jų chromatografinius atsakus su silibino B kalibravimo kreive.
Statistinė analizė
Visi duomenys išreiškiami kaip vidutinis ± standartinis nuokrypis (SD). Dispersijos analizė (ANOVA) ir F-testas buvo naudojami siekiant įvertinti PLE sąlygų įtaką silimarino derliui. Vidutinės vertės buvo laikomos reikšmingai skirtingomis, kai lyginamų parametrų rezultatai skyrėsi esant P=0,05 reikšmingumo lygiui. Kiekvieno Fišerio koeficiento reikšmingumui patikrinti buvo naudojamos P reikšmės.
Rezultatai
1a paveiksle pateikiama tipinė PLE ekstrakto, gauto iš S. marianum L. Gaertner vaisių, chromatograma, o 1b paveiksle pavaizduota silimarino ekstrahavimo iš pieno erškėčio tirpalo chromatograma, paruošta ištirpinant standartizuotą sausą S. marianum L. Gaertner ekstraktą metanolyje (1 mg / ml). Analizuojant PLE arba Soxhlet ekstraktų chromatogramas su standartizuoto tirpalo (sulaikymo trukmė, UV – Vis spektrai ir smailės grynumo indeksas) chromatogramomis, paaiškėjo, kad taikant chromatografijos sąlygas galima tinkamai ištirti tiriamus junginius, kurių smailės sunumeruotos nuo 1 iki 6, iš imties matricos komponentų. Smailės buvo identifikuojamos: (1) silkristinas, (2) silidianinas, (3) silibinas A, (4) silibinas B, (5) izosilibinas A ir (6) izosilibinas B.
Kaip išgauti pienių erškėčius?
Skirtingai nuo daugumos žolelių, pienių dagčių sėklos nėra labai gerai ištraukiamos vandenyje, todėl nebandykite iš jų paruošti puodelio arbatos! Vietoj to valgykite šviežias maltas sėklas arba gaukite geros kokybės kapsulę. Jei naudosite sėklas, nusipirkite jas visas, o tada sumalkite pagal poreikį (aš naudoju kavos malūnėlį, kad iš jų pasidarytų stambūs milteliai). Sėklos iš karto skonis riebios, saldžios ir kartios - galbūt tai yra įgytas skonis, bet visai nemalonus. Pradėkite nuo to, kad vartojate nuo 1, 2 iki 1 valgomojo šaukšto per dieną, apibarstę maistą, ir pažiūrėkite, kaip jis jums atrodo, koreguodami kiekį, kiek jums reikia.
Ingridientai
1 puodelis drungno vandens
1 puodelis 100 įrodomojo alkoholio, naudoju degtinę
Jei įmanoma, sumalkite nuo ¾ iki 1 puodelio pieno rogių sėklų
Nurodymai
Sterilizuokite naudojamą „Mason“ stiklainį maždaug 10 minučių įdėdami į verdantį vandenį arba 15 minučių padėdami ant lentynos maždaug 250 laipsnių orkaitėje.
Supilkite visus ingredientus į „Mason“ indelį.
Ant stiklainio uždėkite naują dangtį ir tvirtai prisukite jį žiedu.
Stipriai purtykite stiklainį apie 1 minutę.
Įdėkite stiklainį penkioms savaitėms į tamsią vėsą.
Kasdien purtykite stiklainį, kad pieno dagčių sėklos neplauktų į viršų, ir visiškai užpilkite alkoholiu ir vandeniu.
Pasibaigus nurodytam savaitės skaičiui, pieno varškę pertrinkite nuo skysčio per smulkių tinklelių filtrą - laikydami skystį. Jei neturite tinkamo tinklelio filtro, naudokite mažą kiaurasamtį ir (arba) išklokite kiaurasamtį su keliais kavos filtrais, kad sumažintumėte angų dydį.
Kiek laiko įsigalės pienių erškėčiai?
Pieno rogių sėkla gali apsaugoti kepenų ląsteles nuo toksinių chemikalų ir vaistų. Panašu, kad jis taip pat turi cukraus kiekį kraujyje mažinantį, antioksidacinį ir priešuždegiminį poveikį.
Oksidacinio streso parametrų pagerėjimas buvo nuolat pastebimas šešių mėnesių' gydymo trukmė specializuota pieno daglių tiekimo sistema (2). Oksidacinio streso modelių pagerėjimas lemia geresnį insulino signalizavimą ir kepenų ląstelių funkcionavimą.
Kiek laiko turėtų būti vartojamas pieno dagys? (Pieno rogių dozavimas)
Pieno erškėčiai laikomi saugiais, kai skiriamos 420 mg per parą dozės, dalijamos iki 41 mėnesio. Vienas šaltinis siūlo 12–15 g sausų vaisių paros dozes esant dispepsijai ir tulžies sistemos sutrikimams, o ekstraktas, kuriame yra 200–400 mg silimarino per parą, laikomas veiksmingu esant įvairiems kepenų sutrikimams.
Pieno erškėčių privalumai
1. Palaiko kepenų sveikatą
Vienas iš dažniausiai naudojamų pieno erškėčių yra kepenų sutrikimų gydymas. 2016 m. Atliktas tyrimas parodė, kad pieno erškėtrožės pelėms pagerino dietos sukeltus kepenų pažeidimus. Reikia daugiau įrodymų, kad įrodytų, kad pieno rogės taip pat naudingos žmogaus kepenims. Tačiau mokslininkai teigia, kad taip yra. Veiklioji pienių erškėčio sudedamoji dalis silimarinas veikia kaip antioksidantas, mažindamas laisvųjų radikalų gamybą. Mokslininkai mano, kad tai sukuria detoksikuojantį poveikį, todėl pieno rogė gali būti naudinga kepenų problemoms spręsti.
Kol nebus atlikta daugiau tyrimų, pieno grybelis nerekomenduojamas kaip pagrindinis kepenų problemų gydymo būdas. Bet tai gali būti naudinga išbandyti papildomą gydymą.
2. Skatina odos sveikatą
Pieno erškėčių aliejus gali būti naudojamas vietiškai odos sveikatai pagerinti.
Pieno erškėčiai gali padėti sveikai odai. 2015 m. Atliktas tyrimas parodė, kad pienligė padėjo pagerinti uždegimines odos sąlygas, kai tepama ant pelių odos.
Kito tyrimo metu laboratorijos aplinkoje taip pat nustatyta, kad pieno erškėčiai turi antioksidacinį ir senėjimo poveikį žmogaus odos ląstelėms.
Norint išsiaiškinti, kokios naudos žmogus gali tikėtis tepdamas pieno erškėtrožių odą, reikia atlikti tolesnius tyrimus su žmonėmis.
3. Sumažina cholesterolio kiekį
Padidėjęs cholesterolio kiekis gali sukelti širdies sveikatos problemų ir padidinti žmogaus insulto tikimybę.
2006 m. Atliktas tyrimas rodo, kad pieno dagčiai gali vaidinti svarbų vaidmenį mažinant cholesterolio kiekį. Nustatyta, kad cholesterolio kiekis buvo mažesnis žmonėms, vartojantiems pieno erškėčių diabetui gydyti, nei vartojusiems placebą.
4. Palaiko svorio metimą
Pradiniai 2016 m. Atlikti tyrimai su gyvūnais parodė, kad silimarinas sumažino svorio peles, kurios buvo maitinamos dieta, kuria siekiama padidinti svorį.
Tai rodo, kad pieno usnis gali būti naudingas norintiems sulieknėti. Tačiau norint tai patvirtinti, reikia atlikti daugiau tyrimų apie pienligės poveikį žmonių svorio netekimui.
5. Sumažina atsparumą insulinui
Tyrimas su pelėmis nustatė, kad pieno rogelių ekstraktas padėjo sumažinti atsparumą insulinui. Atsparumas insulinui yra II tipo cukriniu diabetu sergančių žmonių problema.
Nors šie tyrimai rodo, kad pienligė gali vaidinti svarbų vaidmenį gydant diabetą, reikia atlikti daugiau tyrimų, kad būtų galima patvirtinti, ar pieno rogelis sumažina atsparumą insulinui ir palaiko diabeto valdymą.
6. Gerina alerginės astmos simptomus
Veiklioji pienių daglių medžiaga gali padėti sumažinti uždegimą. 2012 m. Atliktas tyrimas parodė, kad silimarinas padėjo apsaugoti nuo uždegimo pelių, sergančių alergine astma, kvėpavimo takuose.
Norint sužinoti, ar silimarinas naudingas astmos simptomams žmonėms, reikia atlikti daugiau tyrimų.
7. Riboja vėžio plitimą
Pieno usnis gali padėti sustabdyti tam tikrų rūšių vėžio plitimą. 2016 m. Apžvalgoje nustatyta, kad pieno dagčių ekstraktas slopina kolorektalinio vėžio vėžio ląstelių augimą.
Reikia daugiau tyrimų, kad būtų galima nustatyti, kaip pieną galima naudoti kovojant su vėžiu.
8. Palaiko kaulų sveikatą
Pieno usnio arbata gali padėti išvengti kaulų nykimo, kurį sukelia estrogeno trūkumas. Pieno erškėčiai gali atlikti esminį vaidmenį palaikant kaulų sveikatą. 2013 m. Atliktas tyrimas parodė, kad pienligė padėjo išvengti kaulų praradimo. Tyrime buvo nagrinėjamas būtent kaulų netekimas, kurį sukelia estrogeno trūkumas. Kol kas nėra aišku, ar pieno dagčiai yra vienodai naudingi kaulų netekimui dėl skirtingos priežasties. Kad būtų saugu padaryti išvadą, jog pieno usnis palaiko žmonių kaulų sveikatą, reikia tolesnių tyrimų.
9. Gerina pažinimą
2015 m. Atliktas tyrimas parodė, kad pieno erškėtrožės padidino atsparumą oksidaciniam stresui. Oksidacinis stresas yra potenciali Alzheimerio ligos priežastis.
Tokiu būdu pienligė gali padėti pagerinti pažinimą ir gydyti degeneracines būsenas, turinčias įtakos protui. Norint patvirtinti pieno erškėčių poveikį pažinimui, reikia atlikti daugiau tyrimų su žmonėmis.
10. Didina imuninę sistemą
Pieno erškėčiai gali padėti sustiprinti žmogaus imuninį atsaką ir padėti kovoti su infekcija.
2016 m. Atlikto tyrimo su gyvūnais metu nustatyta, kad vartojant pieno erškėčių ekstraktą pagerėjo imunitetas. Senesniame tyrime nustatyta, kad pieno rogių ekstraktas turėjo teigiamą poveikį žmonių imuniniam atsakui.
Norint, kad mokslininkai galėtų užtikrintai pasakyti, kad pieno dagčiai stiprina žmogaus imuninę sistemą, reikia daugiau tyrimų su dalyviais.
Pieno usnis šalutinis poveikis
Panašu, kad pienligė turi nedaug šalutinių reiškinių, net vartojant keletą metų. Kai kuriems žmonėms yra pykinimas, viduriavimas, niežėjimas ir vidurių pūtimas.
Norėdami gauti birių pienių miltelių, susisiekite su mumisherbext@undersun.com.cn
Nuorodos: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
